失眠是一種十分普遍的疾病,在睡眠障礙中受到 主要的關(guān)注,失眠患者的主要表現(xiàn)有入睡困難、睡眠 質(zhì)量下降和睡眠時間減少等表現(xiàn) 。不僅如此,長期失 眠還可以造成記憶功能下降、注意功能下降、計劃功 能下降,從而導致白天困倦,工作能力降低,在停止工 作時容易出現(xiàn)日間嗜睡現(xiàn)象。
一、實驗材料
1.實驗動物
動物由長春市億斯實驗動物 技 術(shù) 有 限 責 任 公 司 (動 物 許 可 證 號 :SCXK (吉) - 2016- 0003,序號201900026508) 提供,wistar大鼠30 只,體重200—220g。實驗場所:長春中醫(yī)藥大學針灸 經(jīng)絡研究所。
2.飼養(yǎng)環(huán)境
室內(nèi)溫度控制在20℃—22℃,相對濕 度45%—65%,自然光,避免噪聲和其他干擾。將30只 大鼠先適應性喂養(yǎng)7天,大鼠自由進食飼料和水,墊料 保持干燥,7天后稱量體重。普通飼料按國家實驗動物 飼養(yǎng)成分統(tǒng)一標準配置 。
二、實驗分組
大鼠正常喂養(yǎng)1周后,按體重隨機分組,分為模型 組、藥物組、推拿組,每組大鼠按自然序號進行標記, 采用熒光涂抹技術(shù),在大鼠身上用黃色熒光筆進行標記。
三、實驗藥物與設備
(一)實驗藥物 對苯丙氨酸 (PCPA),美國Sigma公司,CAS NO. 742400- 2。人參歸脾丸,貴州同濟堂制藥有限公司,批 號:國藥準字Z20010033。配水為湯。戊巴比妥鈉,國藥集團化學試劑有限公司,批號:WS20130601。p物質(zhì) 試劑盒:南京建成生物工程研究所,p物質(zhì)凍干粉,批 號:KIT2019012。β內(nèi)啡肽試劑盒:南京建成生物工程 研究所,β內(nèi)啡肽凍干粉,批號:KIT2019016。
(二)實驗儀器 上海精密科學儀器有限公司JY10001電子秤;賽 多利斯科學儀器北京有限公司BSA124S- CW精密電子 秤;酶標儀:伯騰酶標儀BIOTek- SMAT;恒溫水浴箱: 精宏DK-S22。
四、實驗方法
(一)實驗動物的失眠造模 30只大鼠同時進行失眠造模,造模采用腹腔注射 PCPA混懸液,連續(xù)注射2天,RCPA臨用 前 按 大 鼠 100mg/kg用量,用弱堿性生理鹽水配置成混懸液備用, 第一次腹腔注射36小時后,大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律缺失, 白天與夜晚皆活動不斷,造模大鼠腹腔注射戊巴比妥 30mg/Kg(預實驗測得引起100%大鼠睡眠的最小劑 量)。提起大鼠尾巴,將大鼠腹部朝上放在墊塊上記 錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時間,以翻正反射消 失為發(fā)生睡眠。以翻正反射,提示造模成功。
(二)實驗方法 1.模型組:每天按照正常標準喂食、喂水。 2.藥物組:每天按照人∶大鼠=1∶30的比例,對藥 物組大鼠灌胃按體重轉(zhuǎn)毫升數(shù)。 3.推拿組:取穴及部位:中脘、神闕、中極,腹部。手 法:摩法、振法。以爽身粉為推拿介質(zhì),以臍為中心順 時針掌摩全腹5分鐘,以調(diào)暢氣機;雙手指腹加團揉全腹10分鐘,以調(diào)臟通腑、平衡陰陽;單掌按振中脘穴 2分鐘,單掌掌振神闕穴3分鐘,單掌閃振中極穴5分 鐘,以健脾和胃,補益氣血;隨呼吸掌按腹部,以神闕 穴為中心,吸氣時深按,吐氣時輕抬,時間5分鐘,以引 氣歸元,寧心安神。
五、觀測指標
1.p物質(zhì)。ELISA檢測法:腹腔靜脈取血5ml,分離 血清,用鼠p物質(zhì)ELISA檢測試劑盒檢測血清p物質(zhì)的 濃度,嚴格按照試劑盒要求進行操作。于波長450nm的酶儀上讀取各孔的OD值。 2.β內(nèi)腓肽。ELISA檢測法:腹腔靜脈取血5ml,分離 血清,采用β內(nèi)啡肽ELISA試劑盒,嚴格按照試劑盒要求 進行操作。于波長450nm的酶儀上讀取各孔的OD值。
六、數(shù)據(jù)統(tǒng)計
數(shù)據(jù)分析擬采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件完成。 ELISA數(shù)值計算,采用ELISAAcalc進行計算。數(shù)據(jù)采用 成組T檢驗,進行兩兩對比分析。
七、結(jié)果(見下表)
八、討論
失眠是一種十分普遍的生理心理疾病,有報道稱 全球約一半的成年人受到慢性失眠的影響。長期失眠 不僅可以造成免疫力下降、內(nèi)分泌紊亂、心功能下降 等軀體機能的損傷,還會引起焦慮、注意力下降等心 理功能的紊亂,本項目是通過振腹推拿的方法研究對 失眠大鼠的影響,旨在運用推拿手法幫助解決現(xiàn)在社 會上因生理、心理等原因引起的失眠問題,對于提高 護理的保健意識和社會保健意識有積極的意義。提高 失眠患者對于自身失眠狀態(tài)的認識和重視程度,加強自我保健意識,幫助解決現(xiàn)在社會上因生理、心理等 原因引起的失眠問題。推拿手法屬于中醫(yī)特色,對身 體沒有傷害,屬于保健類的治療方法,和藥物治療相 比,安全性較高,無副作用。通過本研究探討推拿和失 眠的關(guān)系及對失眠大鼠睡眠的改善情況,為臨床治療 失眠提供了相關(guān)依據(jù)。腹部推拿可以提高失眠大鼠的 p物質(zhì)和β內(nèi)啡肽水平,對腦組織及晝夜節(jié)律變化有 較好的輔助作用。
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